Sumários
Resolução de problemas
10 Abril 2025, 14:00 • Carlos Miguel Ribeiro da Silva Farinha
Resolução de problemas sobre Western Blot e Imunoprecipitação
Transcriptómica e enriquecimento funcional I
10 Abril 2025, 09:00 • Francisco Rodrigues Pinto
Análise de Enriquecimento Funcional
DINÂMICA DA MODIFICAÇÃO PÓS-TRADUCIONAL E LOCALIZAÇÃO SUBCELULAR DO FACTOR DE TRANSCRIÇÃO STAT3 EM CÉLULAS HELA ESTIMULADAS COM LIF
4 Abril 2025, 14:00 • Ines Pankonien
Dia 2 – SDS-PAGE e Western Blot
Separação das proteínas por peso molecular e transferência para uma membrana para deteção de STAT3 e fosfo-STAT3 utilizando quimioluminescência.
· Carregamento das amostras (extratos citosólicos e nucleares), segundo um esquema definido.
· Eletroforese SDS-PAGE realizada a 90–100 V.
· Transferência das proteínas para membranas de PVDF usando a montagem em “sanduíche”, com corrente de 400 mA durante 1 hora.
· Bloqueio da membrana com leite magro a 5%, seguido de incubação durante a noite com os anticorpos primários anti-STAT3 e anti-pSTAT3 a 4°C com agitação.
· Lavagem da membrana para remover anticorpos primários não ligados.
· Incubação com anticorpo secundário conjugado com HRP durante 1 hora.
· Lavagem da membrana para remover anticorpos secundários não ligados.
· Revelação quimioluminescente (ECL) da ligação dos anticorpos.
· Visualização do sinal utilizando o sistema ChemiDoc XRS+.
Transcriptómica e enriquecimento funcional I
4 Abril 2025, 09:00 • Francisco Rodrigues Pinto
Análise de Enriquecimento Funcional
DINÂMICA DA MODIFICAÇÃO PÓS-TRADUCIONAL E LOCALIZAÇÃO SUBCELULAR DO FACTOR DE TRANSCRIÇÃO STAT3 EM CÉLULAS HELA ESTIMULADAS COM LIF
3 Abril 2025, 14:00 • Ines Pankonien
Dia 2 – SDS-PAGE e Western Blot
Separação das proteínas por peso molecular e transferência para uma membrana para deteção de STAT3 e fosfo-STAT3 utilizando quimioluminescência.
· Carregamento das amostras (extratos citosólicos e nucleares), segundo um esquema definido.
· Eletroforese SDS-PAGE realizada a 90–100 V.
· Transferência das proteínas para membranas de PVDF usando a montagem em “sanduíche”, com corrente de 400 mA durante 1 hora.
· Bloqueio da membrana com leite magro a 5%, seguido de incubação durante a noite com os anticorpos primários anti-STAT3 e anti-pSTAT3 a 4°C com agitação.
· Lavagem da membrana para remover anticorpos primários não ligados.
· Incubação com anticorpo secundário conjugado com HRP durante 1 hora.
· Lavagem da membrana para remover anticorpos secundários não ligados.
· Revelação quimioluminescente (ECL) da ligação dos anticorpos.
· Visualização do sinal utilizando o sistema ChemiDoc XRS+.