Sumários

DINÂMICA DA MODIFICAÇÃO PÓS-TRADUCIONAL E LOCALIZAÇÃO SUBCELULAR DO FACTOR DE TRANSCRIÇÃO STAT3 EM CÉLULAS HELA ESTIMULADAS COM LIF

3 Abril 2025, 09:00 • Ines Pankonien

Dia 2 – SDS-PAGE e Western Blot

 

Separação das proteínas por peso molecular e transferência para uma membrana para deteção de STAT3 e fosfo-STAT3 utilizando quimioluminescência.

·      Carregamento das amostras (extratos citosólicos e nucleares), segundo um esquema definido.

·      Eletroforese SDS-PAGE realizada a 90–100 V.

·      Transferência das proteínas para membranas de PVDF usando a montagem em “sanduíche”, com corrente de 400 mA durante 1 hora.

·      Bloqueio da membrana com leite magro a 5%, seguido de incubação durante a noite com os anticorpos primários anti-STAT3 e anti-pSTAT3 a 4°C com agitação.

·      Lavagem da membrana para remover anticorpos primários não ligados.

·      Incubação com anticorpo secundário conjugado com HRP durante 1 hora.

·      Lavagem da membrana para remover anticorpos secundários não ligados.

·      Revelação quimioluminescente (ECL) da ligação dos anticorpos.

·      Visualização do sinal utilizando o sistema ChemiDoc XRS+.

DINÂMICA DA MODIFICAÇÃO PÓS-TRADUCIONAL E LOCALIZAÇÃO SUBCELULAR DO FACTOR DE TRANSCRIÇÃO STAT3 EM CÉLULAS HELA ESTIMULADAS COM LIF

28 Março 2025, 14:00 • Ines Pankonien

Dia 1 – Extração e Quantificação de Proteínas

 

Separação de proteínas citosólicas e nucleares de células HeLa que expressam diferentes variantes de STAT3, tratadas ou não com LIF (100 ng/mL), para análise das modificações pós-traducionais e da localização do STAT3.

·      Extração fracionada de proteínas do citoplasma e do núcleo.

·      Quantificação de proteínas utilizando o método de Bradford, baseado na ligação do corante Azul Brilhante de Coomassie às proteínas e leitura da absorvância a 595 nm.

·      Preparação de géis de poliacrilamida a 10% (SDS-PAGE). 

DINÂMICA DA MODIFICAÇÃO PÓS-TRADUCIONAL E LOCALIZAÇÃO SUBCELULAR DO FACTOR DE TRANSCRIÇÃO STAT3 EM CÉLULAS HELA ESTIMULADAS COM LIF

28 Março 2025, 09:00 • Ines Pankonien

Dia 2 – SDS-PAGE e Western Blot

 

Separação das proteínas por peso molecular e transferência para uma membrana para deteção de STAT3 e fosfo-STAT3 utilizando quimioluminescência.

·      Carregamento das amostras (extratos citosólicos e nucleares), segundo um esquema definido.

·      Eletroforese SDS-PAGE realizada a 90–100 V.

·      Transferência das proteínas para membranas de PVDF usando a montagem em “sanduíche”, com corrente de 400 mA durante 1 hora.

·      Bloqueio da membrana com leite magro a 5%, seguido de incubação durante a noite com os anticorpos primários anti-STAT3 e anti-pSTAT3 a 4°C com agitação.

·      Lavagem da membrana para remover anticorpos primários não ligados.

·      Incubação com anticorpo secundário conjugado com HRP durante 1 hora.

·      Lavagem da membrana para remover anticorpos secundários não ligados.

·      Revelação quimioluminescente (ECL) da ligação dos anticorpos.

·      Visualização do sinal utilizando o sistema ChemiDoc XRS+.

DINÂMICA DA MODIFICAÇÃO PÓS-TRADUCIONAL E LOCALIZAÇÃO SUBCELULAR DO FACTOR DE TRANSCRIÇÃO STAT3 EM CÉLULAS HELA ESTIMULADAS COM LIF

27 Março 2025, 14:00 • Ines Pankonien

Dia 1 – Extração e Quantificação de Proteínas

 

Separação de proteínas citosólicas e nucleares de células HeLa que expressam diferentes variantes de STAT3, tratadas ou não com LIF (100 ng/mL), para análise das modificações pós-traducionais e da localização do STAT3.

·      Extração fracionada de proteínas do citoplasma e do núcleo.

·      Quantificação de proteínas utilizando o método de Bradford, baseado na ligação do corante Azul Brilhante de Coomassie às proteínas e leitura da absorvância a 595 nm.

·      Preparação de géis de poliacrilamida a 10% (SDS-PAGE). 

DINÂMICA DA MODIFICAÇÃO PÓS-TRADUCIONAL E LOCALIZAÇÃO SUBCELULAR DO FACTOR DE TRANSCRIÇÃO STAT3 EM CÉLULAS HELA ESTIMULADAS COM LIF

27 Março 2025, 09:00 • Ines Pankonien

Dia 1 – Extração e Quantificação de Proteínas

 

Separação de proteínas citosólicas e nucleares de células HeLa que expressam diferentes variantes de STAT3, tratadas ou não com LIF (100 ng/mL), para análise das modificações pós-traducionais e da localização do STAT3.

·      Extração fracionada de proteínas do citoplasma e do núcleo.

·      Quantificação de proteínas utilizando o método de Bradford, baseado na ligação do corante Azul Brilhante de Coomassie às proteínas e leitura da absorvância a 595 nm.

·      Preparação de géis de poliacrilamida a 10% (SDS-PAGE).