Sumários
ICC Sessão 1
3 Maio 2024, 14:00 • Fernanda Murtinheira
Breve introdução ao método de imunocitoquímica.
Explicação do protocolo experimental.
Incubação de células HeLa referência e HeLaSTAT3-/- com TNF-alpha (5 a 60 minutos).
Fixação das células com metanol.
Permeabilização, bloqueio e incubação com anticorpo primário anti-NFkB.
Explicação dos princípios subjacentes a cada uma das etapas.
ICC Sessão 1
3 Maio 2024, 09:00 • Fernanda Murtinheira
Breve introdução ao método de imunocitoquímica.
Explicação do protocolo experimental.
Incubação de células HeLa referência e HeLaSTAT3-/- com TNF-alpha (5 a 60 minutos).
Fixação das células com metanol.
Permeabilização, bloqueio e incubação com anticorpo primário anti-NFkB.
Explicação dos princípios subjacentes a cada uma das etapas.
Dinâmica da Localização do Factor NF-kB em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 2)
2 Maio 2024, 14:00 • Ines Pankonien
No dia 2, os estudantes realizaram a eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida e o immunoblot. Para a SDS-PAGE, cada grupo preparou um mini-gel com gel resolvente a 10%T, seguindo as instruções do protocolo. Aplicaram as amostras nos poços do gel utilizando uma micropipeta, conforme o esquema de aplicação indicado, e deixaram a eletroforese correr a 120 V até o azul de bromofenol atingir o fim do gel resolvente (60-90 minutos).
Dinâmica da Localização do Factor NF-kB em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 1)
2 Maio 2024, 09:00 • Ines Pankonien
Na aula prática os estudantes trataram células HeLa com TNF-a durante intervalos de 5 a 60 minutos. Em seguida, realizaram a extração diferencial de proteínas do citosol e do núcleo das células. Após a extração, procederam à quantificação de proteínas utilizando o método de Bradford. Esta etapa envolveu a criação de uma curva padrão para calcular o volume de amostra necessário para carregar 10 µg de proteína na SDS gel eletroforeses para o dia 2.
WB Sessão 3
2 Maio 2024, 09:00 • Hugo Miguel Raposo Correia Botelho
Western blotting: incubação de anticorpo secundário, acquisição de imagens de luminescência, densitometria e revisão geral da atividade experimental.