Sumários

ICC Sessão 2

18 Abril 2024, 09:00 • Fernanda Murtinheira

Incubação das células HeLa referência e HeLa^STAT3-/- com anticorpo secundário.

Coloração dos núcleos com o corante Hoechst 33342.

Montagem das lamelas em lâminas de microscopia.

Explicação dos princípios subjacentes a cada uma das etapas.

Explicação dos princípios por trás da microscopia widefield.

Explicação sobre a utilização do software do microscópio.

Visualização das células ao microscópio.

Aquisição de imagens (50 a 100 células) de cada grupo experimental.

Dinâmica da Localização do Factor NF-kB em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 2)

18 Abril 2024, 09:00 • Ines Pankonien

No dia 2, os estudantes realizaram a eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida e o immunoblot. Para a SDS-PAGE, cada grupo preparou um mini-gel com gel resolvente a 10%T, seguindo as instruções do protocolo. Aplicaram as amostras nos poços do gel utilizando uma micropipeta, conforme o esquema de aplicação indicado, e deixaram a eletroforese correr a 120 V até o azul de bromofenol atingir o fim do gel resolvente (60-90 minutos).

Dinâmica da Localização do Factor NF-kB em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 1)

12 Abril 2024, 14:00 • Ines Pankonien

Na aula prática os estudantes trataram células HeLa com TNF-a durante intervalos de 5 a 60 minutos. Em seguida, realizaram a extração diferencial de proteínas do citosol e do núcleo das células. Após a extração, procederam à quantificação de proteínas utilizando o método de Bradford. Esta etapa envolveu a criação de uma curva padrão para calcular o volume de amostra necessário para carregar 10 µg de proteína na SDS gel eletroforeses para o dia 2.

Dinâmica da Localização do Factor NF-kB em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 1)

12 Abril 2024, 09:00 • Ines Pankonien

SIM sessão 3

11 Abril 2024, 14:00 • Francisco Rodrigues Pinto

Simulação do comportamento da via de NFkB em resposta a TNF - Parte 2