Aula 18

5 Maio 2022, 17:30 • Solveig Thorsteinsdottir

O desenvolvimento do sistema nervoso 2. A crista neural e o sistema nervoso periférico. A crista neural e os seus principais derivados. O papel do snail na delaminação da crista neural. As vias de migração das células da crista neural. Como encontram o caminho? Exemplos da crista neural cefálica e do tronco. A descoberta de células líderes e seguidoras na crista neural do tronco, ambas derivadas da mesma célula precursora, a célula pré-migradora.

Not Taught.

3 Maio 2022, 13:00 • Solveig Thorsteinsdottir

A BDA tem uma carga horária de aulas práticas de 2h por semana mas são lecionadas em aulas de 4h 15 em 15 dias. Sendo assim nesta data, esta turma não teve aula prática.

Not Taught.

3 Maio 2022, 08:00 • Solveig Thorsteinsdottir

A BDA tem uma carga horária de aulas práticas de 2h por semana mas são lecionadas em aulas de 4h 15 em 15 dias. Sendo assim nesta data, esta turma não teve aula prática.

Aula 5

3 Maio 2022, 08:00 • Solveig Thorsteinsdottir

Processamento das imagens adquiridas na aula anterior. Construção de mosaicos, colocação de escalas e medição do eixo maior dos embriões dos diferentes estádios. Elaboração de um relatório com os resultados obtidos. Esta aula contou com o apoio do Luís Marques, técnico de microscopia.

Protocolo da aula:

ANÁLISE DAS IMAGENS DE EMBRIÕES DE GALINHA E AS SUAS MEDIÇÕES EM FIJI

Instalar Fiji:

1. descarregar o zip da pagina www.fiji.sc

2. criar a pasta C:\Fiji no Windows

3. descarregar o conteúdo do zip para essa pasta, deverão ficar com "C:\Fiji\fiji.app"

4. abrir o executável dentro dessa pasta, fazer as atualizações pedidas, e reiniciar se necessário

Montar mosaicos:

(apenas para BX60 e BX51)

1. em cada pasta que contem os ficheiros de "azulejos" (geralmente "Default"), remover o ficheiro "metadata.txt" - podem cortar e cortar para a pasta hierarquicamente acima.

2. abrir um dos ficheiros no Fiji (basta arrastar), ir a Image > Properties, e apontar os valores de "Pixel width / height" em micrómetros

3. Na barra do Fiji "Click here to search", procurar por "Grid/Collection Stitching", e abrir ("Run") esse plugin

4. Escolher "Type: Unknown Position", "OK".

5. Localizar para a pasta em actividade desde o ponto (1.).

Manter todos os settings, e único "check" deverá ser em "Display Fusion". "OK", e aguardar.

6. Na imagem computada, ir a Image > Properties, e repor os valores de "Pixel width / height" em micrómetros descobertos no ponto (2.)

7. Adicionar uma barra de escala de tamanho conveniente em Analyze > Tools > Scale Bar

8. Guardar como *.tiff

Medições eixo maior:

1. Abrir imagem mosaico computada no Fiji.

2. Clicar no ícone de seleção/linha com o botão direito e escolher "Segmented line".

3. Traçar um segmento quebrado reproduzindo fielmente a curva do embrião, duplo clique para terminar.

4. Duplo clique no ícone de linha para ajustar uma "spline" à linha, e aumentar a sua espessura.

Opção:

4.1. Medir a linha multi-segmentada directamente em "Analyze > Measure", apontar o valor para o Excel

OU

4.2. Ajustar a espessura da linha para compreender todo o embrião, e ir a "Edit > Selection > Straighten". Traçar uma linha perfeitamente rectilínea e medir essa linha em "Analyze > Measure". Apontar esse valor no Excel.

Dados:

1. Recolher medições do eixo maior do maior número possível de estádios e criar um gráfico de crescimento

2. Criar uma “plate” com um conjunto de imagens representativas dos diferentes estádios, idealmente à mesma escala

(dica: usar sempre a mesma escala nos mosaicos, inseri-los no Powerpoint, e ajustar os tamanhos relativos de todas as imagens de modo a que as BARRAS de escala tenham todas visualmente o mesmo tamanho)

Anotar convenientemente cada imagem, por exemplo apontando estruturas comuns na sequência (ver ficheiro “Formato_relatorio2_imagens_galinha.pdf”).

Material: Computadores portáteis, ratos, Fiji.

Aula 17

2 Maio 2022, 15:00 • Solveig Thorsteinsdottir

O desenvolvimento do sistema nervoso 1. Padronização dorsal-ventral do tubo neural focando na espinal medula. Gradiente ventral-dorsal de Shh e gradiente dorsal-ventral de Bmps ativam fatores de transcrição diferentes que especificam a diferenciação de neurónios e interneurónios diferentes.

Padronização antero-posterior do sistema nervoso central: o gradiente Wnt8 abordado anteriormente. A regionalização do cérebro através de ativação de fatores de transcrição específicos. O papel da constelação de fatores de transcrição no estabelecimento dos centros de organização secundários: o organizador istmico, a zona limitans intratalámica e a região anterior neural e os seus morfogénios, Fgf8, Shh e Fgf8 respetivamente. O papel destes fatores parácrinos na regionalização ainda mais fina das diferentes regiões do cérebro.